什么是酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)檢測(cè)儀。是酶聯(lián)吸附試驗(yàn)的專(zhuān)用儀器又稱(chēng)微孔板檢測(cè)器。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類(lèi),但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來(lái)進(jìn)行分析。
酶標(biāo)儀工作原理
工作原理為一臺(tái)升級(jí)的的分光光度計(jì)
酶標(biāo)儀與分光光度計(jì)的不同
1. 通量上:支持6、12、24、48、96、384孔板
2. 功能上:?jiǎn)喂δ苊笜?biāo)儀(吸收光、化學(xué)發(fā)光、熒光)多功能酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀能做什么
凡是與光信號(hào)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)、需要高通量、需要節(jié)省試劑的實(shí)驗(yàn)且可以轉(zhuǎn)移到微孔板中液體的物質(zhì),都可以考慮使用微孔板檢測(cè)儀(酶標(biāo)儀)進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)。
酶標(biāo)儀分類(lèi):
1.基于濾光方式不同可分為:濾光片式酶標(biāo)儀和光柵式酶標(biāo)儀(上海閃譜就是此類(lèi))
2.按功能劃分可分為:光吸收酶標(biāo)儀、化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀、熒光酶標(biāo)儀和多功能酶標(biāo)儀。
光吸收檢測(cè)常見(jiàn)應(yīng)用
1.DNA/RNA含量測(cè)定常用于快速檢測(cè)質(zhì)粒DNA濃度
2.ELISA(酶聯(lián)吸附試驗(yàn))檢測(cè)方法多(間接 法、競(jìng)爭(zhēng)法、雙抗夾心法等)
3.細(xì)胞活力檢測(cè)MTT\XTT等酶活動(dòng)力學(xué)檢測(cè)
光吸收法優(yōu)缺點(diǎn):
1.優(yōu)點(diǎn):靈敏、特異性、簡(jiǎn)單、快速、對(duì)環(huán)境沒(méi)污染、穩(wěn)定易于自動(dòng)化操作等。
2.不足:降低靈敏度(針對(duì)新方法其易受到雜質(zhì)干擾)、動(dòng)態(tài)范圍比較窄(3數(shù)量級(jí)),步驟繁瑣(清洗步驟多)
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
發(fā)光是指物體吸收外加能量激發(fā),發(fā)出可見(jiàn)光
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)又被稱(chēng)為自發(fā)光檢測(cè),這類(lèi)檢測(cè)與其他檢測(cè)的區(qū)別在于,整個(gè)測(cè)試過(guò)程中需要提供外界光源。那么檢測(cè)器所捕捉到的光是來(lái)自于化合物的發(fā)光反應(yīng)(將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能)
熒光檢測(cè)
熒光檢測(cè)特點(diǎn):應(yīng)用領(lǐng)域廣、可多標(biāo)記檢測(cè)、靈敏度高
熒光檢測(cè)常見(jiàn)應(yīng)用:
1.生物大分子(DNA/RNA或蛋白質(zhì))
2.熒光(熒光標(biāo)記物,如GFP\YFP\CFP等)
3.細(xì)胞學(xué)分析(細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒理、細(xì)胞遷移、細(xì)胞吸附、細(xì)胞滲透)
4.線粒體膜電位分析
5.鈣流檢測(cè)
操作注意事項(xiàng)
酶標(biāo)儀的功能是用來(lái)讀取酶聯(lián)試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果,試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過(guò)目測(cè)判斷結(jié)果,操作過(guò)程隨意性較大,在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣,會(huì)造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng):
1.使用加液器加液,加液頭不能混用。
2.洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機(jī)洗板,避免交叉污染。
3.嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作,反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。
4.在測(cè)量過(guò)程中,請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板,以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。
5.請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,操作完成后請(qǐng)洗手。
6.如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害,請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說(shuō)明,以防對(duì)操作人員造成損害。
7.如果儀器接觸過(guò)污染性或傳染性物品,請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。
8.不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源。
9.對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù),以達(dá)到最佳效果。
10.使用后蓋好防塵罩。
11.出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系,切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。
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